#قاب_هنری
در این اثر هنری، زنی جوان در مرکز یک دشت وسیع و وحشی ایستاده است و با یک باله هوایی از پرندگان استارلینگ مواجه است. این حرکت هماهنگ، نمادی از افکار بیش‌ازحد است و افکار مزاحمی را نشان می‌دهد که می‌توانند ما را غرق کنند. چهار پرنده‌ای که از این رقص جمعی جدا می‌شوند، افکاری را به تصویر می‌کشند که تلاش میکنند توجه ما را از زیبایی لحظه حال منحرف کنند.
@irbioinformatics
این اثر هنری ما را دعوت می‌کند تا به اهمیت بازگرداندن تمرکز و انتخاب زندگی کامل در لحظه حال بیندیشیم، حتی در میان آشوب‌های درونی. یک استعاره زیبا که به ما یادآوری می‌کند آرامش در پذیرش و شگفتی نسبت به دنیای پیرامونمان نهفته است.
در این اثر هنری، زنی جوان در مرکز یک دشت وسیع و وحشی ایستاده است و با یک باله هوایی از پرندگان استارلینگ مواجه است. این حرکت هماهنگ، نمادی از افکار بیش‌ازحد است و افکار مزاحمی را نشان می‌دهد که می‌توانند ما را غرق کنند. چهار پرنده‌ای که از این رقص جمعی جدا می‌شوند، افکاری را به تصویر می‌کشند که تلاش میکنند توجه ما را از زیبایی لحظه حال منحرف کنند.
@irbioinformatics
این اثر هنری ما را دعوت می‌کند تا به اهمیت بازگرداندن تمرکز و انتخاب زندگی کامل در لحظه حال بیندیشیم، حتی در میان آشوب‌های درونی. یک استعاره زیبا که به ما یادآوری می‌کند آرامش در پذیرش و شگفتی نسبت به دنیای پیرامونمان نهفته است.
👍5
#جزوه_عیب_یابی_HPLC
یک فایل ارزشمند و عالی برای عیب یابی و رفع ایراد دستگاه های HPLC
دستگاه HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) یک تکنیک آنالیتیکی پیشرفته است که برای جداسازی، شناسایی و اندازه‌گیری اجزای مختلف یک مخلوط استفاده می‌شود. در این روش، نمونه مورد نظر با فاز متحرک (مایع) وارد ستون کروماتوگرافی می‌شود که حاوی فاز ساکن است. اجزای مختلف نمونه بر اساس برهم‌کنش‌های شیمیایی و فیزیکی با فاز ساکن و فاز متحرک با سرعت‌های متفاوتی از ستون عبور میکنند و جدا می‌شوند. HPLC به دلیل دقت بالا، حساسیت زیاد، و توانایی آن در تجزیه مواد پیچیده، در زمینه‌های مختلفی از جمله داروسازی، شیمی تجزیه، صنایع غذایی و زیست‌فناوری کاربرد دارد.
@irbioinformatics
یک فایل ارزشمند و عالی برای عیب یابی و رفع ایراد دستگاه های HPLC
دستگاه HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) یک تکنیک آنالیتیکی پیشرفته است که برای جداسازی، شناسایی و اندازه‌گیری اجزای مختلف یک مخلوط استفاده می‌شود. در این روش، نمونه مورد نظر با فاز متحرک (مایع) وارد ستون کروماتوگرافی می‌شود که حاوی فاز ساکن است. اجزای مختلف نمونه بر اساس برهم‌کنش‌های شیمیایی و فیزیکی با فاز ساکن و فاز متحرک با سرعت‌های متفاوتی از ستون عبور میکنند و جدا می‌شوند. HPLC به دلیل دقت بالا، حساسیت زیاد، و توانایی آن در تجزیه مواد پیچیده، در زمینه‌های مختلفی از جمله داروسازی، شیمی تجزیه، صنایع غذایی و زیست‌فناوری کاربرد دارد.
@irbioinformatics
👍5
HPLC.pdf
1.2 MB
@irbioinformatics
#جزوه_عیب_یابی_HPLC
یک فایل ارزشمند و عالی برای عیب یابی و رفع ایراد دستگاه های HPLC
#جزوه_عیب_یابی_HPLC
یک فایل ارزشمند و عالی برای عیب یابی و رفع ایراد دستگاه های HPLC
👍4❤2
#معرفی_تکنولوژی_TALEN
تدوین: ح.رسولی دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی دانشگاه تربیت مدرس تهران
@irbioinformatics
تکنولوژی TALEN# یا Transcription Activator-Like Effector Nucleases اولین تکنولوژی ویرایش ژنوم آسان برای استفاده در حوزه مهندسی ژنتیک بود که انقلابی در ویرایش ژنوم به راه انداخت. کاربرد این سیستم در گونه‌های مختلف باعث جلب توجه دانشمندان به فرایند جهش‌زایی هدفمند شد. موفقیت‌های چشمگیر در ویرایش ژنوم از آن زمان که برای اولین بار این سیستم معرفی شد می توان به اولین تجاری‌سازی یک گیاه ویرایش‌شده و اولین انسان درمان‌شده از سرطان اشاره کرد.
@irbioinformatics
از آن زمان که برای اولین بار این سیستم ویرایش ژنومی معرفی شد، TALENها عمدتاً با تکنولوژی‌های CRISPR جایگزین شده‌اند که ساخت آنها نسبتاً آسان‌تر، چندگانه‌سازی آنها راحت‌تر است و در نتیجه تکنیک‌های مشتق شده متعددی ایجاد کرده‌اند. با این حال، قابلیت موقعیت‌یابی انعطاف‌پذیر و دقیق TALEN همچنان بی‌نظیر و بی رقیب است و به همین دلیل این تکنولوژی‌ها همچنان در حال تکامل به ویژگی‌های جدید هستند که در حوزه مهندسی ژنتیک کاربردهای فراوانی را از خود نشان می دهند. در این مقاله مروری، حقایق اساسی، دستورالعمل‌های طراحی و همچنین تحولات مهم گذشته و پیشرفت‌های هیجان‌انگیز جدید در رابطه با تکنولوژی TALEN ارائه شده است.
تدوین: ح.رسولی دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی دانشگاه تربیت مدرس تهران
@irbioinformatics
تکنولوژی TALEN# یا Transcription Activator-Like Effector Nucleases اولین تکنولوژی ویرایش ژنوم آسان برای استفاده در حوزه مهندسی ژنتیک بود که انقلابی در ویرایش ژنوم به راه انداخت. کاربرد این سیستم در گونه‌های مختلف باعث جلب توجه دانشمندان به فرایند جهش‌زایی هدفمند شد. موفقیت‌های چشمگیر در ویرایش ژنوم از آن زمان که برای اولین بار این سیستم معرفی شد می توان به اولین تجاری‌سازی یک گیاه ویرایش‌شده و اولین انسان درمان‌شده از سرطان اشاره کرد.
@irbioinformatics
از آن زمان که برای اولین بار این سیستم ویرایش ژنومی معرفی شد، TALENها عمدتاً با تکنولوژی‌های CRISPR جایگزین شده‌اند که ساخت آنها نسبتاً آسان‌تر، چندگانه‌سازی آنها راحت‌تر است و در نتیجه تکنیک‌های مشتق شده متعددی ایجاد کرده‌اند. با این حال، قابلیت موقعیت‌یابی انعطاف‌پذیر و دقیق TALEN همچنان بی‌نظیر و بی رقیب است و به همین دلیل این تکنولوژی‌ها همچنان در حال تکامل به ویژگی‌های جدید هستند که در حوزه مهندسی ژنتیک کاربردهای فراوانی را از خود نشان می دهند. در این مقاله مروری، حقایق اساسی، دستورالعمل‌های طراحی و همچنین تحولات مهم گذشته و پیشرفت‌های هیجان‌انگیز جدید در رابطه با تکنولوژی TALEN ارائه شده است.
👍5
TALE and TALEN genome editing technologies.pdf
2.6 MB
TALE and TALEN genome editing technologies
@irbioinformatics
@irbioinformatics
❤6👍1
ذهن آدمی مانند ساعتی است
که مدام از کار می‌افتد
ذهن را باید با اندیشه های خوب کوک کرد...
امروزتون رو پر از اندیشه های بکر و خوب شروع کنید،
ذهنتون رو خالی از هرگونه بدی کنید، زیبایی ها را ببینید...
صبح جمعه‌تون بخیر ❤️
که مدام از کار می‌افتد
ذهن را باید با اندیشه های خوب کوک کرد...
امروزتون رو پر از اندیشه های بکر و خوب شروع کنید،
ذهنتون رو خالی از هرگونه بدی کنید، زیبایی ها را ببینید...
صبح جمعه‌تون بخیر ❤️
❤6
میگن ادم به هرچی فک کنه و براش تلاش کنه بهش میرسه. اینکه مستر ماسک پیش عمو دونالد واساده و مغز متفکر تیم عمو هستش برام جالب نبود ولی چیزی که نظرم‌جلب کرد نوشته ای هستش که روی تیشرت مستر ماسک که عبارت occupy marsهستش که داره این به مخاطب میگه که ایلان ایده استعمار مریخ و گسترش زندگی به اونجا رو داره شدیدا دنبال میکنه شاید فک‌کنین این یه ایده تبلیغاتیه ولی در واقع هدف غایی بیزنس ایلانه که بتونه به صورت انحصاری مریخ در دست بگیره و این دور از انتظار نیست.
🤔4👍2
معرفی کتاب
در کتاب Biology of Belief، دکتر بروس لیپتون دیدگاه جدیدی درباره حیات ارائه می‌دهد که بر اساس تحقیقات پیشگامانه وی در زمینه سلول‌های بنیادی در دانشگاه استنفورد است. در این کتاب، دکتر لیپتون بیان می‌کند که ژن‌ها کنترل‌کننده اصلی زیست‌شناسی نیستند و درک سلولی از محیط عامل اصلی در فرآیندهای زیستی است.
دکتر لیپتون اشاره می‌کند که امروزه دانشجویان و پزشکان همچنان بر این باورند که ژن‌ها، که به‌عنوان نقشه‌های ساخت پروتئین عمل میکنند، عوامل اصلی در فرآیندهای زیستی هستند.
@irbioinformatics
با این حال، وی دیدگاهی متفاوت مطرح می‌کند که بیان می‌کند ژن‌ها تنها دستورالعمل هستند و آنچه در واقع زیست‌شناسی را کنترل می‌کند، نحوه‌ای است که سلول‌ها محیط اطراف خود را درک کرده و به آن پاسخ می‌دهند. این مفهوم، که به نقش اپی‌ژنتیک و تأثیر محیط بر بیان ژن‌ها اشاره دارد، چارچوب جدیدی برای درک فرایندهای زیستی ارائه می‌دهد.
در کتاب Biology of Belief، دکتر بروس لیپتون دیدگاه جدیدی درباره حیات ارائه می‌دهد که بر اساس تحقیقات پیشگامانه وی در زمینه سلول‌های بنیادی در دانشگاه استنفورد است. در این کتاب، دکتر لیپتون بیان می‌کند که ژن‌ها کنترل‌کننده اصلی زیست‌شناسی نیستند و درک سلولی از محیط عامل اصلی در فرآیندهای زیستی است.
دکتر لیپتون اشاره می‌کند که امروزه دانشجویان و پزشکان همچنان بر این باورند که ژن‌ها، که به‌عنوان نقشه‌های ساخت پروتئین عمل میکنند، عوامل اصلی در فرآیندهای زیستی هستند.
@irbioinformatics
با این حال، وی دیدگاهی متفاوت مطرح می‌کند که بیان می‌کند ژن‌ها تنها دستورالعمل هستند و آنچه در واقع زیست‌شناسی را کنترل می‌کند، نحوه‌ای است که سلول‌ها محیط اطراف خود را درک کرده و به آن پاسخ می‌دهند. این مفهوم، که به نقش اپی‌ژنتیک و تأثیر محیط بر بیان ژن‌ها اشاره دارد، چارچوب جدیدی برای درک فرایندهای زیستی ارائه می‌دهد.
👍6
#نکات_تکنیکی
در هنگام انجام Real-Time PCR (یا qPCR)، یکی از مشکلاتی که ممکن است رخ دهد، بخار شدن یا "evaporation#" نمونه‌ها است. این مسئله می‌تواند به دلایل مختلفی اتفاق بیفتد:
تنظیمات نادرست دما یا پروفایل حرارتی: در صورتی که دمای کالیبراسیون دستگاه PCR یا پروفایل حرارتی به درستی تنظیم نشده باشد، ممکن است در طول چرخه‌های PCR، بخار در لوله‌ها یا در نمونه‌ها ایجاد شود. به ویژه در دمای بالای مرحله دناتوراسیون (۹۴-۹۸ درجه سانتیگراد) ممکن است رطوبت از محیط خارج شود.
نصب نادرست درپوش دستگاه PCR: در صورتی که درپوش‌ها به طور کامل بسته نشوند یا به درستی مهر و موم نشوند، بخار به راحتی می‌تواند از نمونه‌ها خارج شود و بر نتیجه تاثیر بگذارد.
استفاده از لوله‌های PCR نامناسب یا شکسته: لوله‌های PCR که کیفیت مناسبی ندارند یا ترک خورده‌اند، ممکن است نتوانند به درستی نمونه‌ها را مهر و موم کنند و بخار از آنها خارج شود.
مدت زمان طولانی در دمای بالا: اگر نمونه‌ها مدت زیادی در دمای بالا باقی بمانند، به‌ویژه اگر با سرعت زیاد افزایش دما مواجه شوند، ممکن است بخار شدن در طی مراحل مختلف رخ دهد.
تنظیمات دستگاه در حالت بدون پوشش (Open system): بعضی از دستگاه‌های Real-Time PCR از یک سیستم "open" برای درپوش‌های لوله‌ها استفاده میکنند که می‌تواند باعث تبخیر نمونه‌ها و ایجاد نتایج غیر دقیق شود.
برای جلوگیری از بخار شدن نمونه‌ها در Real-Time PCR:
از لوله‌ها و کلاهک‌های PCR با کیفیت و مناسب استفاده کنید.
از برنامه‌های دمایی دقیق و مناسب برای مرحله‌های مختلف PCR استفاده کنید.
از دستگاه‌های PCR با سیستم مهر و موم خوب استفاده کنید.
در صورت امکان، از سیستم‌های "sealed" استفاده کنید که از تبخیر نمونه‌ها جلوگیری کنند.
در هنگام انجام Real-Time PCR (یا qPCR)، یکی از مشکلاتی که ممکن است رخ دهد، بخار شدن یا "evaporation#" نمونه‌ها است. این مسئله می‌تواند به دلایل مختلفی اتفاق بیفتد:
تنظیمات نادرست دما یا پروفایل حرارتی: در صورتی که دمای کالیبراسیون دستگاه PCR یا پروفایل حرارتی به درستی تنظیم نشده باشد، ممکن است در طول چرخه‌های PCR، بخار در لوله‌ها یا در نمونه‌ها ایجاد شود. به ویژه در دمای بالای مرحله دناتوراسیون (۹۴-۹۸ درجه سانتیگراد) ممکن است رطوبت از محیط خارج شود.
نصب نادرست درپوش دستگاه PCR: در صورتی که درپوش‌ها به طور کامل بسته نشوند یا به درستی مهر و موم نشوند، بخار به راحتی می‌تواند از نمونه‌ها خارج شود و بر نتیجه تاثیر بگذارد.
استفاده از لوله‌های PCR نامناسب یا شکسته: لوله‌های PCR که کیفیت مناسبی ندارند یا ترک خورده‌اند، ممکن است نتوانند به درستی نمونه‌ها را مهر و موم کنند و بخار از آنها خارج شود.
مدت زمان طولانی در دمای بالا: اگر نمونه‌ها مدت زیادی در دمای بالا باقی بمانند، به‌ویژه اگر با سرعت زیاد افزایش دما مواجه شوند، ممکن است بخار شدن در طی مراحل مختلف رخ دهد.
تنظیمات دستگاه در حالت بدون پوشش (Open system): بعضی از دستگاه‌های Real-Time PCR از یک سیستم "open" برای درپوش‌های لوله‌ها استفاده میکنند که می‌تواند باعث تبخیر نمونه‌ها و ایجاد نتایج غیر دقیق شود.
برای جلوگیری از بخار شدن نمونه‌ها در Real-Time PCR:
از لوله‌ها و کلاهک‌های PCR با کیفیت و مناسب استفاده کنید.
از برنامه‌های دمایی دقیق و مناسب برای مرحله‌های مختلف PCR استفاده کنید.
از دستگاه‌های PCR با سیستم مهر و موم خوب استفاده کنید.
در صورت امکان، از سیستم‌های "sealed" استفاده کنید که از تبخیر نمونه‌ها جلوگیری کنند.
👍5
#نکات_تکنیکی
در کار با دستگاه #اسپکتروفتومتر، رعایت برخی نکات مهم برای حصول نتایج دقیق و معتبر ضروری است. مهم‌ترین نکاتی که باید به آنها توجه کنید عبارتند از:
1. کالیبراسیون دستگاه:
قبل از هر آزمایش، دستگاه اسپکتروفتومتر باید به درستی کالیبره شود. معمولاً از یک محلول صفر (blank) استفاده می‌شود که هیچ ماده‌ای در آن وجود ندارد یا ماده‌ای که خواص نوری آن شناخته شده است.
کالیبراسیون باید در طول روز و قبل از هر تغییر عمده در تنظیمات دستگاه انجام شود.
2. انتخاب طول موج مناسب:
انتخاب طول موج صحیح برای اندازه‌گیری بستگی به ویژگی‌های جذب ماده نمونه دارد. برای مثال، برخی از مولکول‌ها در طول موج‌های خاصی از نور بیشترین جذب را دارند (مانند جذب پروتئین‌ها در حدود 280 نانومتر).
برای اندازه‌گیری مواد مختلف، از جدول‌های استاندارد یا مقالات علمی استفاده کنید تا طول موج مناسب را انتخاب کنید.
3. استفاده از محلول صفر (Blank):
برای هر نمونه، باید یک محلول صفر (معمولاً حلالی که نمونه در آن حل شده) برای تنظیم دستگاه استفاده شود تا تأثیرات احتمالی حلال‌ها یا سایر مواد جانبی حذف شوند.
محلول صفر باید از همان حلال و شرایط مشابه نمونه باشد.
4. حفظ دقت در رقت‌ها:
رقت‌های نمونه باید به دقت تنظیم و اندازه‌گیری شوند، زیرا غلظت نمونه می‌تواند تأثیر زیادی بر نتیجه نهایی داشته باشد.
در صورتی که غلظت نمونه بسیار بالا باشد، ممکن است دستگاه قادر به اندازه‌گیری آن نباشد یا خطای زیادی در نتایج ایجاد کند.
5. پاکیزگی کووت‌ها (Cuvettes):
کووت‌های استفاده شده برای نمونه‌ها باید کاملاً تمیز باشند. هر گونه آلودگی، لکه یا اثر انگشت روی کووت می‌تواند بر دقت اندازه‌گیری تأثیر بگذارد.
کووت‌ها باید به طور مرتب با محلول مناسب شسته و خشک شوند.
6. تنظیم دمای نمونه:
دمای نمونه‌ها می‌تواند بر خواص جذب نوری آنها تأثیر بگذارد. برخی از اسپکتروفتومترها مجهز به سیستم‌های کنترل دما هستند، اما در غیر این صورت بهتر است دمای نمونه‌ها در محدوده مناسب (معمولاً دمای اتاق) نگه داشته شود.
7. توجه به نوع نمونه:
نوع و ویژگی‌های نمونه (مانند رنگ، غلظت و نوع ترکیب شیمیایی) می‌تواند بر جذب نوری آن اثر بگذارد.
برای نمونه‌های رنگی یا کدر، از رقت‌های مناسب استفاده کنید تا دقت اندازه‌گیری بالا رود.
8. زمان خواندن اندازه‌گیری:
برای هر اندازه‌گیری، زمان خواندن باید به دقت تنظیم شود. معمولاً برخی از اسپکتروفتومترها نیاز به مدت زمانی دارند تا ثبات نسبی در جذب نوری نمونه ایجاد شود.
9. توجه به طیف ورودی و خروجی:
اسپکتروفتومتر معمولاً از نور سفید یا منبع نوری خاصی استفاده می‌کند که باید در طول فرآیند اندازه‌گیری ثابت بماند. تغییرات در نور ورودی می‌تواند نتایج اندازه‌گیری را تحت تأثیر قرار دهد.
10. ثبت و ذخیره نتایج:
پس از انجام اندازه‌گیری، نتایج باید به درستی ثبت و ذخیره شوند. بهتر است داده‌ها همراه با اطلاعات مربوط به شرایط آزمایش (مانند طول موج، دما و نوع محلول) ذخیره شوند.
با رعایت این نکات، می‌توان دقت نتایج اسپکتروفتومتری را افزایش داد و از بروز خطاها جلوگیری کرد.
در کار با دستگاه #اسپکتروفتومتر، رعایت برخی نکات مهم برای حصول نتایج دقیق و معتبر ضروری است. مهم‌ترین نکاتی که باید به آنها توجه کنید عبارتند از:
1. کالیبراسیون دستگاه:
قبل از هر آزمایش، دستگاه اسپکتروفتومتر باید به درستی کالیبره شود. معمولاً از یک محلول صفر (blank) استفاده می‌شود که هیچ ماده‌ای در آن وجود ندارد یا ماده‌ای که خواص نوری آن شناخته شده است.
کالیبراسیون باید در طول روز و قبل از هر تغییر عمده در تنظیمات دستگاه انجام شود.
2. انتخاب طول موج مناسب:
انتخاب طول موج صحیح برای اندازه‌گیری بستگی به ویژگی‌های جذب ماده نمونه دارد. برای مثال، برخی از مولکول‌ها در طول موج‌های خاصی از نور بیشترین جذب را دارند (مانند جذب پروتئین‌ها در حدود 280 نانومتر).
برای اندازه‌گیری مواد مختلف، از جدول‌های استاندارد یا مقالات علمی استفاده کنید تا طول موج مناسب را انتخاب کنید.
3. استفاده از محلول صفر (Blank):
برای هر نمونه، باید یک محلول صفر (معمولاً حلالی که نمونه در آن حل شده) برای تنظیم دستگاه استفاده شود تا تأثیرات احتمالی حلال‌ها یا سایر مواد جانبی حذف شوند.
محلول صفر باید از همان حلال و شرایط مشابه نمونه باشد.
4. حفظ دقت در رقت‌ها:
رقت‌های نمونه باید به دقت تنظیم و اندازه‌گیری شوند، زیرا غلظت نمونه می‌تواند تأثیر زیادی بر نتیجه نهایی داشته باشد.
در صورتی که غلظت نمونه بسیار بالا باشد، ممکن است دستگاه قادر به اندازه‌گیری آن نباشد یا خطای زیادی در نتایج ایجاد کند.
5. پاکیزگی کووت‌ها (Cuvettes):
کووت‌های استفاده شده برای نمونه‌ها باید کاملاً تمیز باشند. هر گونه آلودگی، لکه یا اثر انگشت روی کووت می‌تواند بر دقت اندازه‌گیری تأثیر بگذارد.
کووت‌ها باید به طور مرتب با محلول مناسب شسته و خشک شوند.
6. تنظیم دمای نمونه:
دمای نمونه‌ها می‌تواند بر خواص جذب نوری آنها تأثیر بگذارد. برخی از اسپکتروفتومترها مجهز به سیستم‌های کنترل دما هستند، اما در غیر این صورت بهتر است دمای نمونه‌ها در محدوده مناسب (معمولاً دمای اتاق) نگه داشته شود.
7. توجه به نوع نمونه:
نوع و ویژگی‌های نمونه (مانند رنگ، غلظت و نوع ترکیب شیمیایی) می‌تواند بر جذب نوری آن اثر بگذارد.
برای نمونه‌های رنگی یا کدر، از رقت‌های مناسب استفاده کنید تا دقت اندازه‌گیری بالا رود.
8. زمان خواندن اندازه‌گیری:
برای هر اندازه‌گیری، زمان خواندن باید به دقت تنظیم شود. معمولاً برخی از اسپکتروفتومترها نیاز به مدت زمانی دارند تا ثبات نسبی در جذب نوری نمونه ایجاد شود.
9. توجه به طیف ورودی و خروجی:
اسپکتروفتومتر معمولاً از نور سفید یا منبع نوری خاصی استفاده می‌کند که باید در طول فرآیند اندازه‌گیری ثابت بماند. تغییرات در نور ورودی می‌تواند نتایج اندازه‌گیری را تحت تأثیر قرار دهد.
10. ثبت و ذخیره نتایج:
پس از انجام اندازه‌گیری، نتایج باید به درستی ثبت و ذخیره شوند. بهتر است داده‌ها همراه با اطلاعات مربوط به شرایط آزمایش (مانند طول موج، دما و نوع محلول) ذخیره شوند.
با رعایت این نکات، می‌توان دقت نتایج اسپکتروفتومتری را افزایش داد و از بروز خطاها جلوگیری کرد.
👍5❤1
در هنگام انجام تکنیک SDS-PAGE رعایت چه نکاتی برای حصول نتایج قابل اعتماد و با شفافیت بالا ضروری است؟
👍3
هنگام لود پروتئین‌ها بر روی ژل SDS-PAGE (الکتروفورز ژل پلی‌آکریل‌آمید در حضور سدیم دودسیل سولفات)، توجه به نکات زیر برای اطمینان از دقت و صحت نتایج ضروری است:
1. آماده‌سازی نمونه‌ها:
هموژن‌سازی صحیح نمونه‌ها: پروتئین‌ها باید به طور کامل در بافر مناسب حل شوند. عدم حل شدن کامل پروتئین‌ها می‌تواند باعث عدم بارگذاری یکنواخت و تاثیر بر نتایج شود.
استفاده از بافر لودینگ مناسب: نمونه‌ها باید در بافر SDS-PAGE loading buffer که معمولاً حاوی SDS، گلیسین، دترجنت و ماده رنگی است، رقیق شوند. بافر باید حاوی عامل احیاء مانند DTT یا بتا-مرکاپتو اتانول برای حفظ پروتئین‌ها در حالت کاهش یافته باشد.
پایداری پروتئین‌ها: اگر پروتئین‌ها زمان زیادی در دمای اتاق قرار گیرند، می‌توانند دچار دناتوره شدن شوند. بنابراین، پروتئین‌ها باید در یخ یا در دمای پایین ذخیره شوند تا از فعالیت آنزیمی یا تخریب آنها جلوگیری شود.
2. تنظیم غلظت پروتئین:
غلیظ بودن نمونه‌ها: غلظت پروتئین‌ها باید در محدوده مناسب باشد (معمولاً 10-50 میکروگرم در هر چاهک). غلظت بالاتر از حد معمول می‌تواند باعث بارگذاری بیش از حد شده و منجر به تداخل پروتئین‌ها و نتیجه‌گیری اشتباه شود. از طرفی، غلظت خیلی کم ممکن است منجر به سیگنال ضعیف و عدم مشاهده پروتئین‌ها شود.
اندازه‌گیری دقیق غلظت پروتئین: برای اندازه‌گیری دقیق غلظت پروتئین‌ها می‌توان از روش‌های مختلفی مانند Bradford یا BCA استفاده کرد.
3. دمای نمونه‌ها:
نمونه‌ها باید قبل از بارگذاری بر روی ژل در دمای مناسب (معمولاً 95 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه) حرارت داده شوند تا پروتئین‌ها به طور کامل دناتوره شده و به شکل زنجیره خطی (که برای الکتروفورز مناسب است) درآیند.
4. استفاده از لودینگ صحیح:
بارگذاری یکنواخت: هنگام بارگذاری نمونه‌ها در چاهک‌های ژل، باید دقت کرد که نمونه به طور یکنواخت و بدون ایجاد حباب به داخل چاهک وارد شود. استفاده از پیپت دقیق و آرام بسیار مهم است.
پرهیز از تماس مستقیم پیپت با ژل: از تماس نوک پیپت با ژل پرهیز کنید تا از آسیب به ژل و ایجاد سیگنال‌های خطای غیرطبیعی جلوگیری شود.
5. استفاده از نشانگر وزن مولکولی (Marker):
لودینگ نشانگر وزن مولکولی: حتماً از نشانگر وزن مولکولی مناسب برای تعیین اندازه پروتئین‌ها استفاده کنید. نشانگر باید در شرایط مشابه با نمونه‌ها بارگذاری شود.
کنترل‌های مناسب: بهتر است کنترل‌هایی مانند پروتئین‌های شناخته‌شده با وزن مولکولی مشخص (مثلاً کنترل‌های مثبت و منفی) در کنار نمونه‌ها لود شود.
6. کنترل حجم بارگذاری:
حجم نمونه باید به گونه‌ای باشد که در سطح ژل به طور یکنواخت پخش شود و از هم‌پوشانی و پخش پروتئین‌ها جلوگیری کند. معمولا حجم 10-20 میکرولیتر از نمونه مناسب است.
7. ملاحظات هنگام بارگذاری پروتئین‌های غنی از لیپید یا مواد آنتی‌ژنیک:
اگر پروتئین‌ها حاوی لیپید یا آنتی‌ژن‌هایی هستند که به دلیل ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی مشکل ایجاد میکنند، ممکن است نیاز به پیش‌درمان با مواد خاصی مانند دترجنت‌ها یا حلال‌ها برای حل کردن این ترکیبات باشد.
8. کنترل pH بافر:
اطمینان حاصل کنید که بافر لودینگ و بافر‌های دیگر (مثل بافر running buffer) دارای pH مناسب برای عملکرد صحیح باشند. معمولاً pH مناسب برای بافرها حدود 8.3 است.
9. مراقبت از ژل در حین اجرا:
از وارد کردن گرما به ژل به طور ناخواسته جلوگیری کنید. گرمای زیاد می‌تواند به ژل آسیب رسانده و نتایج را تحت تأثیر قرار دهد.
با رعایت این نکات می‌توانید از دقت و صحت نتایج SDS-PAGE خود اطمینان حاصل کنید و از تداخل یا خطاهای تجربی جلوگیری کنید.
1. آماده‌سازی نمونه‌ها:
هموژن‌سازی صحیح نمونه‌ها: پروتئین‌ها باید به طور کامل در بافر مناسب حل شوند. عدم حل شدن کامل پروتئین‌ها می‌تواند باعث عدم بارگذاری یکنواخت و تاثیر بر نتایج شود.
استفاده از بافر لودینگ مناسب: نمونه‌ها باید در بافر SDS-PAGE loading buffer که معمولاً حاوی SDS، گلیسین، دترجنت و ماده رنگی است، رقیق شوند. بافر باید حاوی عامل احیاء مانند DTT یا بتا-مرکاپتو اتانول برای حفظ پروتئین‌ها در حالت کاهش یافته باشد.
پایداری پروتئین‌ها: اگر پروتئین‌ها زمان زیادی در دمای اتاق قرار گیرند، می‌توانند دچار دناتوره شدن شوند. بنابراین، پروتئین‌ها باید در یخ یا در دمای پایین ذخیره شوند تا از فعالیت آنزیمی یا تخریب آنها جلوگیری شود.
2. تنظیم غلظت پروتئین:
غلیظ بودن نمونه‌ها: غلظت پروتئین‌ها باید در محدوده مناسب باشد (معمولاً 10-50 میکروگرم در هر چاهک). غلظت بالاتر از حد معمول می‌تواند باعث بارگذاری بیش از حد شده و منجر به تداخل پروتئین‌ها و نتیجه‌گیری اشتباه شود. از طرفی، غلظت خیلی کم ممکن است منجر به سیگنال ضعیف و عدم مشاهده پروتئین‌ها شود.
اندازه‌گیری دقیق غلظت پروتئین: برای اندازه‌گیری دقیق غلظت پروتئین‌ها می‌توان از روش‌های مختلفی مانند Bradford یا BCA استفاده کرد.
3. دمای نمونه‌ها:
نمونه‌ها باید قبل از بارگذاری بر روی ژل در دمای مناسب (معمولاً 95 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه) حرارت داده شوند تا پروتئین‌ها به طور کامل دناتوره شده و به شکل زنجیره خطی (که برای الکتروفورز مناسب است) درآیند.
4. استفاده از لودینگ صحیح:
بارگذاری یکنواخت: هنگام بارگذاری نمونه‌ها در چاهک‌های ژل، باید دقت کرد که نمونه به طور یکنواخت و بدون ایجاد حباب به داخل چاهک وارد شود. استفاده از پیپت دقیق و آرام بسیار مهم است.
پرهیز از تماس مستقیم پیپت با ژل: از تماس نوک پیپت با ژل پرهیز کنید تا از آسیب به ژل و ایجاد سیگنال‌های خطای غیرطبیعی جلوگیری شود.
5. استفاده از نشانگر وزن مولکولی (Marker):
لودینگ نشانگر وزن مولکولی: حتماً از نشانگر وزن مولکولی مناسب برای تعیین اندازه پروتئین‌ها استفاده کنید. نشانگر باید در شرایط مشابه با نمونه‌ها بارگذاری شود.
کنترل‌های مناسب: بهتر است کنترل‌هایی مانند پروتئین‌های شناخته‌شده با وزن مولکولی مشخص (مثلاً کنترل‌های مثبت و منفی) در کنار نمونه‌ها لود شود.
6. کنترل حجم بارگذاری:
حجم نمونه باید به گونه‌ای باشد که در سطح ژل به طور یکنواخت پخش شود و از هم‌پوشانی و پخش پروتئین‌ها جلوگیری کند. معمولا حجم 10-20 میکرولیتر از نمونه مناسب است.
7. ملاحظات هنگام بارگذاری پروتئین‌های غنی از لیپید یا مواد آنتی‌ژنیک:
اگر پروتئین‌ها حاوی لیپید یا آنتی‌ژن‌هایی هستند که به دلیل ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی مشکل ایجاد میکنند، ممکن است نیاز به پیش‌درمان با مواد خاصی مانند دترجنت‌ها یا حلال‌ها برای حل کردن این ترکیبات باشد.
8. کنترل pH بافر:
اطمینان حاصل کنید که بافر لودینگ و بافر‌های دیگر (مثل بافر running buffer) دارای pH مناسب برای عملکرد صحیح باشند. معمولاً pH مناسب برای بافرها حدود 8.3 است.
9. مراقبت از ژل در حین اجرا:
از وارد کردن گرما به ژل به طور ناخواسته جلوگیری کنید. گرمای زیاد می‌تواند به ژل آسیب رسانده و نتایج را تحت تأثیر قرار دهد.
با رعایت این نکات می‌توانید از دقت و صحت نتایج SDS-PAGE خود اطمینان حاصل کنید و از تداخل یا خطاهای تجربی جلوگیری کنید.
👍5💯1
📑 A review of transformers in drug discovery and beyond
📕 Journal: Journal of Pharmaceutical Analysis (I.F.=6.1)
🗓Publish year: 2024
🧑💻Authors: Jian Jiang, Long Chen, Lu Ke, ...
🏢Universities: Wuhan Textile University, China - Michigan State University, USA
📎 Study the paper
📲Channel: @irBioinformatics
#review #drug #transformer
📕 Journal: Journal of Pharmaceutical Analysis (I.F.=6.1)
🗓Publish year: 2024
🧑💻Authors: Jian Jiang, Long Chen, Lu Ke, ...
🏢Universities: Wuhan Textile University, China - Michigan State University, USA
📎 Study the paper
📲Channel: @irBioinformatics
#review #drug #transformer
👍1